Det er nesten alle selskapene som solgtebromelain enzympulverer blandet med papain. Det er vanskelig å rense bromelainet til 5000GDU/g. men det er veldig enkelt å rense papainet til 1000000GDU/g. selv til 2000 000 GDU/g. men funksjonene til bromelain er forskjellige fra papain. fargen, orden, vannløseligheten og smaken står i kontrast til det falske produktet og det ekte produktet. De er forskjellen det riktige bromelain-enzympulveret er grått, luktfritt, smakløst og vannuløselig.
Men den falske bromelain har følgende egenskaper:
● Den er lysegul, aromatisk og mild søt, og vannløselig. Det er kjennetegn ved papain.
● Den brukes for å redusere betennelse og lindre smerte. men det er nesten ingen disse funksjonene i papain.
● Det brukes kun som kosttilskudd, ikke tilsetningsstoff, men kan faktisk være farmasøytisk. Men papain brukes bare som kjøttmørningspulver og kosmetikk.
Vi testet bromelain i henhold til SDS-PAGE gel- og GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL og HPLC-metoder, det er mindre målmolekyler i SDS-PAGE-gelmetoden for falske produkter.
Følgende er elektroforeseresultatene for SDS-siden
Flekken ovenfor viser at bare det riktige produktet har samme flekk på rett sted i bildet, men det falske produktet har små flekker på seg, det betyr at molekylvekten knapt er synlig.
Molekylvekten til Bromelain er omtrent 33000, men molekylvekten til papain er 21000. Og HPLC-kromatogrammet:
Du vil se at bare det riktige ekstraktet inneholder de riktige molekylvektene av bromelain og kan påvises ved HPLC.
Men hvis vi bare testet med Gelatin Digestion Unit Analytical Method (GDU), se vedlegg II. Både det riktige og det falske produktet har samme resultater som nedenfor:
Ananasstamme er veldig billig, og hastigheten fra stamme til bromelain er veldig lav, det er noe forurensning i produksjonsprosessen.
Nesten alle bromelain-enzympulverfabrikkene er i nærheten. De bruker fersk stilk. Det er umulig å sende stammen på lang avstand. Råmaterialet bør håndteres så snart som mulig når det samles opp fra åkeren, eller det bør lagres i et miljø med lav temperatur (4-8 grad ) for å unngå proteinnedbrytning. I det virkelige liv kan produsenten faktisk ikke oppfylle noen av de to ovennevnte betingelsene på grunn av for mange stilker ananas. Den rimelige metoden er en balanse mellom håndteringstid og tap av proteinaktivitet. Vanligvis produserer råvarene i høstsesongen for ananas, og lagrer råvarene i et miljø med lav temperatur (4-8 grad ).
Vi gjør en test om SDS-side-elektroforese. I teorien kan vi øke den til 10,000 eller 20,000, men det vil være veldig dyrt. 5000GDU/g og gjør den stabil kanskje på en malto-støtte / mikroinnkapslet en eller noe pluss organisk ekstraksjon/rensing.
Vedlegg I
● Metode 5 SDS polyakrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE)
SDS-PAGE er en denaturert polyakrylamidgelelektroforesemetode. Prinsippet for proteinseparasjon i denne metoden er basert på det faktum at de fleste proteiner kan kombineres med det anioniske overflateaktive stoffet natriumdodecylsulfat (SDS) i et vektforhold for å danne et kompleks
Den negative ladningen som bæres av proteinmolekyler overstiger langt nettoladningen til naturlige proteinmolekyler, og eliminerer ladningseffekten til forskjellige proteinmolekyler og skiller proteiner i henhold til deres molekylstørrelse.
Denne metoden brukes til kvalitativ identifikasjon, renhets- og urenhetskontroll og kvantitativ bestemmelse av proteiner.
1 instrumentenhet
Konstant spenning eller konstant strømforsyning, vertikal plateelektroforesetank og limfremstillingsform.
2. Reagenser
(1) Vann.
(2) Separasjonsgelbuffer (4x, løsning A) 1,5mol/L trihydroksymetylaminometan saltsyrebuffer. Vei 18,15 g trihydroksymetylaminometan og løs den opp med en passende mengde vann. Juster pH-verdien til 88 med saltsyre og fortynn til 100 ml med vann.
(3) Vei 58.0g akrylamid og 20g N,N'-metylenbisakrylamid i 30 prosent akrylamidløsning (B-løsning), løs opp i varmt vann og fortynn til 200 ml, filtrer med filterpapir (oppbevart i mørk).
(4) Vei 10 g natriumdodecylsulfat i 10 prosent SDS-løsning (C-løsning), løs opp i vann og fortynn til 100 ml
(5) Kommersialiseringsreagens av tetrametyletylendiaminløsning (TEMED, D-løsning).
10 prosent ammoniumpersulfatløsning (E-løsning) Vei 10 g ammoniumpersulfat, løs opp i vann og fortynn til 100 ml. Det anbefales å klargjøre det før bruk eller oppbevare det separat ved -20 grader i 2 uker.
(7) Konsentrert gummibuffer (4 ×, F-løsning) 0,5mol/L Trihydroksymetylaminometan Saltsyrebuffer, vei 6,05 g trihydroksymetylaminometan, tilsett en passende mengde vann for å løse opp, juster pH-verdien til 6,8 med saltsyre syre, og fortynn med vann til 100 ml.
(8) Elektrodebuffer (10 ×) Vei 30 g trimetylaminometan, 144 g glycin og 10 g natriumdodecylsulfat, løs dem i vann og fortynn til ca. 800 ml. Juster pH-verdien til 8.1-8.8 med saltsyre, og fortynn til 1000 ml med vann.
(9) Ikke-redusert prøvebuffer (4 ×) Vei 303 g trimetylaminometan, 20 mg bromfenolblått og 8,0 g natriumdodecylsulfat, mål 40 ml glyserol, løs opp i vann og fortynn til ca. 80 ml. Juster pH til 68 med saltsyre, og fortynn til 100 ml med vann.
(8) Elektrodebuffer (10 ×) Vei 30 g trimetylaminometan, 144 g glycin og 10 g natriumdodecylsulfat, løs opp i vann og fortynn til ca. 800 ml. Juster DH-verdien til 81-88 med saltsyre, og fortynn til 1000 ml med vann
(9) Ikke-redusert prøvebuffer (4 ×) Vei 3,03 g trimetylaminometan, 20 mg bromfenolblått og 80 g natriumdodecylsulfat, mål 40 ml glyserol, løs opp i vann og fortynn til ca. 80 ml. Juster pH til 6,8 med saltsyre, og fortynn til 100 ml med vann.
(10) Redusert teststoffbuffer (4 ×) Vei 3,03 g trimetylaminometan, 20 mg bromfenolblått og 80 g natriumdodecylsulfat, mål 40 ml glyserol, løs opp og fortynn med vann til ca. 80 ml, og tilsett - 20ml merkaptoetanol, juster pH til 6,8 med saltsyre, fortynn med vann til 100 ml (eller 3,03 g trimetylaminometan, 20 mg bromfenolblått, 8,0 g natriumdodecylsulfat, mål 40 ml glyserol, løs opp i vann og fortynn til 80 ml, juster pH til 6,8 med saltsyre, fortynn med vann til 100 ml, og før bruk, tilsett ditiotreitol til 100 mmol/L).
● Vedlegg II
Gelatin Digestion Unit Analytical Method (GDU)
A. Formål: Denne prosedyren brukes til å bestemme den proteolytiske aktiviteten til Bromelain Enzyme Pulver.
B. Utstyr:
1. pH-måler
2. Vannbad med konstant temperatur ved 45,0 grader ± 0,1 grad
3. Analytisk balanse
4. Målekolber
5. Volumetriske pipetter
6. Timer
7. Digital byrett (nøyaktighet på 0,1 ml)
8. Avtrekkshette
9. Automatiske pipettere
C. Sikkerhetsregler:
Denne testen må utføres i avtrekket.
1. Bruk standard laboratoriesikkerhetspraksis.
2. Formaldehyd: Forbered og oppbevar i avtrekk til enhver tid. Kjent kreftfremkallende og teratogen.
3. Peroksid: Sterkt oksidasjonsmiddel
D. Reagenser og reagenspreparater:
1. Destillert vann: ca. 500 ml: juster til en pH på 4,5 med 0,1 N HCI.
2. Gelatinsubstrat:
en. Løs opp 25 gram gelatin (Mikrobiologie. 1.04070) i 375 ml varmt vann, kok opp. Avkjøl til 45 grader.
b. Juster pH til 4,5 med 0,1 N HCI og fortynn til 500 ml pH 4,5 destillert vann.
c. Hold gelatinsubstratet ved 45 grader.
3. Bufferløsning:
en. Tilsett 15 g NaCl sakte til 40-50 ml vann i et 150 ml begerglass og rør for å oppløses.
b. Tilsett 0.570 ml eddiksyre.
c. Juster pH til 4,5 med 0.2N HCL (volumet vil være større enn 100 ml.)
4. 3 prosent hydrogenperoksid:
en. Pipetter 2,5 ml 30 prosent hydrogenperoksid (stamløsning) inn i en 25 ml målekolbe og fortynn til volum med pH 4,5 destillert vann
5. 37 prosent formaldehyd pH 9.0: a. Juster et tilstrekkelig volum (100 ml) formaldehyd til pH 9,0 med 0,1 N NaOH (omtrent 20 ml formaldehyd per prøve før pH-justering.)
Gelatin Digestion Unit Analytical Method (GDU) - forts.
6. 0.100 N NaOH: (Kjøpt standardisert) a. Lagerløsning: standardisert til 0,100 N
E. Prosedyre:
1. Enzympreparat:
en. Beregning av enzympreparat
Vekt {{0}}/målaktivitet (omtrent 0,05 g eller 50 mg)
A. Vei enzymet nøyaktig i 50 ml målekolbe
B. Tilsett 8,3 ml bufferløsning.
b. La stå i 30 minutter ved romtemperatur.
C. Fortynn til 50 ml med pH 4,5 destillert vann, tilsett en liten rørestang og rør i ytterligere 10 til 15 minutter
2. Enzymprosedyre:
en. Pipetter 25 ml gelatinsubstrat inn i hvert av to 100 ml beger som inneholder rørestaver og plasser dem i et vannbad ved 45 grader i 5 minutter, en for testløsningen og den andre for den tomme løsningen.
b. Testløsning:
1) Tilsett 1,0 ml bromelain-enzympulverløsning i begerglasset som er beregnet for testløsningen, start timingen og virvl.
2) Etter nøyaktig 20 minutters inkubering ved 45 grader, tilsett 0,1 ml 3 prosent hydrogenperoksid og virvl.
3) Inkuber i ytterligere 5 minutter.
4) Fjern begeret fra vannbadet og sett inn pH-sonden under konstant omrøring.
5) Registrer pH etter 10 sekunder (initial pH)
6) Juster til pH 6.0 med 0.1 N NaOH. (Omtrent 2-4 ml)
*Merk: Når du justerer pH til 6.0 vær forsiktig ved pH 5,8; pH øker sakte og små tilsetninger av NaOH på dette tidspunktet vil øke pH betydelig.
7) Fortsett konstant omrøring, tilsett 10 ml 37 prosent formaldehyd pH 9,0.
8) Registrer pH etter 10 sekunder og 1 minutt.
9) Titrer til pH 9.0 med 0.1 N NaOH.
10) Registrer titreringsvolumet.
Dette er testtiteren, T.c.
Blankløsning: Blankløsningen skal kjøres samtidig med testløsningen. Dette oppnås ved å starte bestemmelsen av blank løsning 12 minutter etter at testløsningen er startet. Det gir deg tid til å fullføre analysen på testløsningen før du må fortsette med den tomme løsningen. 1) Tilsett 0,1 ml 3 prosent hydrogenperoksid til begeret som er beregnet for blindløsningen og virvl.
2) Etter nøyaktig 20 minutters inkubering ved 45 grader, tilsett 1,0 ml bromelainløsning og virvl.
3) Inkuber i ytterligere 5 minutter.
GELATIN FORDØJELSESENHET ANALYTISK METODE (GDU) - forts.
4) Fjern begeret fra vannbadet og sett inn pH-sonden under konstant omrøring.
5) Registrer pH etter 10 sekunder (initial pH)
6) Juster til pH 6.0 med 0.1 N NaOH. (Omtrent 2-4 ml)*Se merknad ovenfor.
7) Fortsett konstant omrøring, tilsett 10 ml 37 prosent formaldehyd pH 9,0.
8) Registrer pH etter 10 sekunder og 1 minutt.
9) Titrer til pH 9.0 med 0.1 N NaOH.
10) Registrer titreringsvolumet. Dette er blanktiteren, B.
F. Beregning:
1. Definisjon: En gelatinfordøyelsesenhet er den mengden enzym som etter 20 minutters fordøyelse ved 45 grader vil frigjøre 1 mg aminonitrogen fra en standard gelatinløsning ved pH 4,5 eller pH 5,5 (GDU pH 4,5 eller pH 5,5).
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) Hvor: T=Testtiter (ml 0.1 N NaOH) B=Blanktiter (ml 0,1 N NaOH) N=Normalitet av standardisert NaOH (dvs. 0,100) Vekt (g)=Startvekt av enzym
G. Testparametere:
1. Enzympreparater fortynnes til en konsentrasjon på ca. 0.001 g/ml (1 mg/ml) eller for bromelain-enzympulverkonsentrat ca. 1-2 GDU/ml. Et referansemateriale analyseres med hver kjøring for å sikre nøyaktighet av metoden.
Guanjie leverer bromelainpulver i bulk ved å bruke GDU-testmetoden. Produksjonsprosessen vår opererer under CGMP-standardverksteder, og bruker tre produksjonslinjer på tvers av to fabrikker og to uavhengige laboratorier. For eventuelle spørsmål angående våre produkter, vennligst kontakt oss påinfo@gybiotech.com.
